PRUEBA MOLECULAR PARA CANCER GASTRICO: PCR

Muestra: Tejido ulcerado obtenido a partir de biopsia gástrica 

Tipo de ácido nucleico: ADN bacteriano 

Extracción del ADN: 

Lisis: Suspensión de los cultivos en buffer tris EDTA, incubación con lisozima 200 mg/mL durante 2 horas a 37°C . Además, se adicionó dodecil sulfato de sodio (SDS) a una concentración final de 0,5% y proteinasa K 200 mg/mL, incubándose a 65°C por dos horas. 

Separación: La solución obtenida fue mezclada con un igual volumen de fenol/cloroformo/alcohol isoamílico y sometida a centrifugación a 4500 rpm durante 15 minutos a 4°C. 

Purificación: Precipitación con alcohol absoluto y resuspensión en agua tridestilada. 

Tipo de PCR: Estándar 

Genes a amplificar: VacA y CagA 

Pasos: 

D: 5min – 95° 

H: 1,5min – 33° 

E: 2min - 72° 

Nro. de ciclos: 30

Visualización: EFO

 

 

Diagnóstico de Helicobacter pylori mediante la reacción en cadena de la polimerasa,Dra. Gloria Premoli, Lic. Anajulia González, Lic. Beatriz Millán-Mendoza, Dra. Tiziana Percoco y Dr. Amilcar Vielma, Scielo, Mayo-Agosto. 2004, disponible en:

http://scielo.sld.cu/scielo.php?pid=S0375-07602004000200001&script=sci_arttext